在心血管领域的研究中，体外模型的选择对实验结论的可靠性和转化价值具有直接影响。新生大鼠心室肌细胞（Neonatal Rat Ventricular Myocytes, NRVMs）由于其高活力、稳定的培养和强大的功能可控性，已成为连接心脏生理病理机制研究、药物研发以及材料生物相容性评估的重要工具。本文依据标准化实验方案和前沿的研究成果，系统梳理了NRVMs的分离和培养技术、关键质控要点及多领域应用场景，为心血管科研工作者提供可落地的实验参考与研究思路。

高效分离与稳定培养是NRVMs最大化研究价值的前提。深圳灵赋拓普实验室团队运用“酶解+梯度离心”技术改良，成功实现了高产量和高纯度NRVMs的规模化获取，核心流程与关键参数如下：

• 第一层涂层：用100mg/mL聚-D-赖氨酸（Poly-D-Lysine, PDL）覆盖培养板表面，室温孵育1小时；清洗去残，用无菌蒸馏水轻柔冲洗3次，去除未结合PDL。
• 第二层涂层：加入15mg/mL层粘连蛋白（Laminin）溶液，37℃恒温孵育2小时（或4℃过夜）。
• 关键禁忌：全程无菌操作，严禁在涂层过程中使培养板干燥，以免显著降低贴壁效率。

各溶液必须严格遵循配方和制备要求，以确保细胞渗透压、酶活性及营养供给的适配。

在选择新生大鼠时，建议优先选择出生1-3天的SD系乳鼠，出生3天的乳鼠为最佳选择。该阶段心肌细胞尚未完全成熟，保留较强的分化增殖能力，细胞提取后存活率可达80%以上，显著提升实验结果的稳定性与重复性。选择超过3天的乳鼠会导致心肌细胞活力下降15%-20%，同时，贴壁后自发搏动的比例也会降低。

乳鼠处理步骤包括：

1. 颈椎脱臼处死后，使用75%酒精浸泡消毒30秒；
2. 在无菌操作台内剪开胸腔取心，放置于预冷的无菌PBS中；
3. 去除肺组织、血管和心房，仅保留心室组织；
4. 将心室剪为1-2mm³的小块，转移至含胶原酶缓冲液的15mL EP管中；
5. 在37℃水浴锅中孵育10分钟，轻柔摇晃确保酶液与组织充分接触；
6. 吸取上清至含10%胎牛血清（FBS）的DMEM中，以终止酶解并避免细胞损伤；
7. 补加新鲜胶原酶缓冲液，重复处理，直到组织块基本消失；
8. 细胞悬液转移至未涂层的玻璃培养皿，37℃孵育1小时，以实现初步纯化；
9. 使用Percoll梯度分离，构建高低密度双层梯度，离心以富集NRVMs。
10. 进行细胞计数和接种，确保细胞的活性。

标准化培养的NRVMs能够模拟体内心肌细胞功能，为心血管研究的多个方向提供关键实验支持。包括细胞周期机制、结构发育以及病理模型的构建等，所有这些实验都为药物评估和基因功能研究提供了有效的平台。

Z6·尊龙凯时作为行业领先品牌，致力于为心血管领域的创新研究提供支持。在生物医药研究的每一个环节，我们都强调操作的严谨性，以确保实验结论的可靠性。我们相信，NRVMs将继续在心血管研究中发挥不可替代的作用，推动生物医疗领域的不断发展。