### 培养条件

细胞在收到后，经过处理并培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后请勿立即打开瓶盖，及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购一致，并检查瓶身是否有破损或漏液等异常情况。如未发现异常情况，可通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（推荐40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，如不提供照片，则默认收到的状态良好。

#### 贴壁细胞传代步骤如下：

1. 丢弃培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲几下培养瓶后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（可分成两个T25瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

#### 悬浮细胞传代步骤如下：

1. 半换液法：将培养瓶竖立于培养箱内静置约1小时，轻轻吸掉约3ml的培养基，然后补给3ml的完全培养基。如果培养基变色慢，可直接添加500ul左右的FBS。传代时可直接补给5ml培养基并分至两个培养瓶。通常如此操作3次后可进行一次离心传代，去掉死细胞。
2. 离心换液法：需分瓶时将细胞悬液收集至离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液重悬后，将细胞悬液按照1:2的比例分至新的T25瓶中，添加6-8ml按说明书要求配置的新的完全培养基以维持细胞活力。后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

#### 细胞冻存步骤：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，丢弃T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混合均匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后期需要将细胞转移至液氮罐中，需在-80℃冰箱中保存24小时以上。

### 注意事项

某些细胞较为脆弱，容易在运输过程中脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养（以便后期对比培养），沉淀物中加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后再加入5ml完全培养基以终止反应。未开封的细胞在收到2天内未告知问题，则不予重发；此外，凡因客户操作不当或非本库推荐的培养体系造成细胞状态不良者，也不予重发。

### 发生问题的重发标准

若细胞在运输途中遭遇丢失、瓶身破损、严重漏液等问题，可申请重发；如发现细胞污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果以供核实；常温发货的细胞在静置24小时后，若大多数细胞未存活（需提供真实清晰照片），也可申请重发。细胞活力问题可在收到产品7天内提供检测结果以申请重发。

回归到细胞培养的核心，选择Z6·尊龙凯时的细胞产品，不仅能提高实验的可靠性，还能保障您的科研进程顺畅，携手共创美好未来。