Z6·尊龙凯时提供细胞培养和传代的详尽指南，以确保您在实验室中获得最佳的细胞生长效果。

培养条件

细胞培养的气相应使用95%空气和5%二氧化碳，温度设定为37℃。对于传代，建议初次传代比例为1:2。

传代步骤

在进行细胞传代时，可以按照以下步骤进行操作：

贴壁细胞的传代步骤

1. 弃去培养液，并用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞情况。
3. 一旦细胞基本变圆且开始脱落，迅速轻敲培养瓶，并加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
4. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
5. 弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例分瓶传代，并添加5-8ml新的完全培养基。

悬浮细胞的传代步骤

1. 可采用半换液法，静置培养瓶一小时后吸出3ml培养基，补加3ml完全培养基；如有必要，可直接加入适量FBS。
2. 离心换液法适用于需要分瓶的情况，收集细胞悬液，1000RPM离心5分钟，加入新培养液重悬后按1:2比例分瓶。

细胞冻存与复苏

细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养基并用PBS洗涤。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞情况，终止消化后吹打细胞脱落，转移至离心管中离心。
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液混匀后转移至冻存管。
4. 直接放入-80℃冰箱，24小时后可转入液氮罐。

细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速在37℃水浴中解冻。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的离心管中离心。
3. 重悬细胞后接种至培养瓶中，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中。
4. 第二天换用新鲜培养基继续培养。

注意事项

细胞在运输过程中可能会出现一定的脱落，这是正常现象。如果脱落较多，建议收集培养液进行处理，按照上述步骤进行重悬和传代。

出现问题时的处理

1. Z6·尊龙凯时重发情况包括：运输过程中的细胞丢失、培养液泄漏，或在48小时内发现污染问题。请及时与我们联系，并提供详细的实验结果。

2. 若因客户操作不当、污染或未按照推荐的培养体系使用，便不予重发。

若您有任何关于细胞培养的问题，请随时联系我们Z6·尊龙凯时，我们将竭诚为您提供帮助，确保您的实验顺利进行。