一、蜡样芽孢杆菌概述

蜡样芽孢杆菌是一种革兰氏阳性杆菌，具备芽孢形成能力，属于需氧芽孢杆菌属。其菌体两端较为平坦，芽孢大小不超过菌体宽度且通常位于中央或偏一端。菌体没有荚膜，且具有周生表毛，具备自主运动能力。适宜的生长温度为25℃至37℃，最佳温度为30℃至32℃。

蜡样芽孢杆菌在营养琼脂平板上生长时，表现为乳白色、不透明、边缘不规则的菌落，外观类似白蜡。在甘露醇卵磷脂多黏菌素琼脂平板上，菌落显示为红色，周围有粉红色的晕圈，表明其能产生卵磷脂酶。在血平板上，出现草绿色β-溶血现象，菌落外观为浅灰色且不透明，类似于白色的毛玻璃。在肉汤中，菌体可引起浑浊，并形成膜或壁环，摇动后易于乳化。

该菌能够分解麦芽糖、蔗糖和水杨苷等，但不分解乳糖。后续的实验显示其对硫化氢和尿素检验呈阴性，而卵磷脂酶检验则为阳性，且能够在24小时内液化明胶。此外，在厌氧条件下，蜡样芽孢杆菌可发酵葡萄糖。

二、标准参考

根据《GB478914-2014食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》进行相关检验。

三、蜡样芽孢杆菌平板计数法

3.1 检验程序

蜡样芽孢杆菌平板计数法检验程序详见相关流程。

3.2 操作步骤

3.2.1 样品处理

冷冻样品需在不超过45℃的条件下解冻15分钟内，或在2℃至5℃下不超过18小时解冻；若未能及时检验则需置于-10℃至-20℃保存。对于非冷冻的易腐样品，应尽快检验，若不能，应在2℃至5℃冰箱保存，24小时内完成检测。

3.2.2 样品制备

称取25g样品，放入225mL的PBS或生理盐水中的无菌均质杯内，使用旋转刀片式均质器以8000至10000r/min均质1至2分钟。若样品为液态，需取25mL样品至装有225mL PBS或生理盐水的无菌锥形瓶中，振荡混匀作为1:10的样品匀液。

3.2.3 样品稀释

将1:10的样品匀液1mL加入装有9mL PBS或生理盐水的稀释管中，混匀后制成1:100的样品匀液。依据样品污染情况，依次制备十倍递增系列稀释样品。

3.2.4 样品接种

选择2至3个合适稀释度的样品匀液（可包含原液），将其以0.3mL、0.3mL和0.4mL的接种量分别移入三块MYP琼脂平板，然后用无菌L棒涂布全平板。

3.2.5 分离与培养

涂布后平板静置10分钟，若样液难以吸收可放置于培养箱30℃±1℃培养1小时。接着翻转平皿，倒置于培养箱中进行24小时的培养。

3.3 鉴定确认

3.3.1 染色镜检

从纯培养的单个菌落中进行革兰氏染色，观察蜡样芽孢杆菌的特征。

3.3.2 生化测试

挑取单个菌落，进行一系列生化试验，包括过氧化氢酶试验、动力试验等，并与其他芽孢杆菌进行差异分析。

四、蜡样芽孢杆菌MPN计数法

4.1 检验程序

蜡样芽孢杆菌MPN计数法检验程序详见相关流程。

4.2 操作步骤

样品处理、样品制备、稀释及接种步骤与之前相同，最后使用胰酪胨大豆多黏菌素肉汤进行培养。

五、结果与报告

根据蜡样芽孢杆菌的培养结果，计算每克（毫升）样品中的菌落数，并报告为CFU/g（mL）或MPN/g（mL）。此外，根据需要，建议报告蜡样芽孢杆菌的生化分型结果，以增强检测的准确性。

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