肿瘤微环境（TME）被形容为肿瘤生长的“土壤”，它由多种细胞类型组成，包括肿瘤细胞、免疫细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞等。这种复杂的微环境不仅影响肿瘤的侵袭和转移能力，还决定了免疫系统是否能够“识别”并攻击癌细胞。然而，传统显微镜下的单色染色技术难以全面捕捉TME的复杂特征。随着多重免疫组化技术（mIHC）的问世，科学家们得以全面了解TME中关键细胞的角色。

肿瘤细胞在TME中的作用

• **标志物**：Pan-CK（细胞角蛋白），用于识别肿瘤细胞，是常用的上皮细胞标志物。
• **功能**：作为肿瘤微环境的核心，肿瘤细胞通过分泌各种因子（如生长因子和趋化因子）来调节周围细胞的行为。

血管内皮细胞

• **标志物**：CD31和VE-cadherin（内皮细胞标志物）。
• **功能**：血管内皮细胞通过形成血管网络为肿瘤提供氧气和营养，参与肿瘤的血管生成。

成纤维细胞

• **标志物**：α-SMA（α-平滑肌肌动蛋白）、FAP（脂肪酸合酶）。
• **功能**：成纤维细胞通过分泌细胞外基质（ECM）成分（如胶原蛋白和纤维连接蛋白）以及多种生长因子（如TGF-β和HGF），为肿瘤细胞提供支持性微环境，并促进血管生成与免疫抑制。

免疫细胞的分类及功能

• **巨噬细胞（TAMs）**：
- M1型（抗肿瘤）：CD86+/CD163-，分泌TNF-α、iNOS等。
- M2型（促肿瘤）：CD86-/CD163+，分泌Arginase、IL-10等。

• **中性粒细胞**：CD16+、CD66b+，参与炎症反应和肿瘤浸润。
• **树突状细胞**：CD11c+、HLA-DR+，介导抗原呈递和免疫激活。
• **T细胞**：
- **细胞毒性T细胞**（CD8+）：直接杀伤肿瘤细胞。
- **调节性T细胞**（Tregs）：抑制抗肿瘤免疫。
• **B细胞**：CD20/CD19、浆细胞CD138，参与体液免疫。
• **自然杀伤细胞（NK）**：CD56+，通过ADCC机制杀伤肿瘤细胞。

• **免疫抑制指标**：PD-1/PD-L1用于评估免疫抑制状态，常与CD8+T细胞共染。
• **T细胞耗竭相关标记**：TIM-3、LAG3用于区分“热”与“冷”肿瘤微环境。

细胞间的相互作用及分析

通过标记物如CD8+、CD3+、CD45等，可以区分瘤内和瘤周的免疫细胞分布。此外，分析巨噬细胞、T细胞及成纤维细胞的共定位和功能关联，有助于深入理解肿瘤微环境的复杂性。

mIHC技术的应用

mIHC技术结合多色荧光染色（例如TSA放大技术）实现定性、定量及定位分析，能够同时检测多个标志物，揭示细胞之间的空间关系和功能状态。例如，在胰腺癌研究中，mIHC可以同时检测CD68（巨噬细胞）、CD163（M2型标志物）、PanCK（肿瘤细胞）等标志物。而在肺癌研究中，则关注CD8+T细胞、PD-L1及Treg等。

肿瘤预后评估与治疗验证

通过分析免疫细胞的密度和亚型，尤其是T细胞浸润及Treg比例，可以为患者的生存率提供预测依据。此外，检测PD-1/PD-L1的表达与免疫检查点抑制剂疗效之间的相关性，能够验证潜在的免疫治疗靶点。

未来的发展方向

随着mIHC技术的不断发展与优化，科学家们正在探索将其与空间转录组学、单细胞测序等技术相结合，以构建更为全面的TME图谱。未来，我们或许能够通过“定制化”的分析，为每位患者制定个性化的免疫治疗方案，从而使免疫系统真正成为对抗癌症的有效武器。
Z6·尊龙凯时将持续关注这一领域的发展，努力为科学研究提供更好的技术支持。

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