Z6·尊龙凯时细胞培养指南

培养条件

气相组成：95%空气与5%二氧化碳；培养温度设定为37℃，使用MEM培养基，添加10% fetal bovine serum (FBS) 和1%青霉素-链霉素（P/S）。

细胞系简介

A-498细胞系由Aaronson S建立，来源于一位52岁肾癌女性患者。传代首次建议使用1:2的比例。

细胞处理和传代方法

细胞处理

收到细胞时，需先用75%酒精喷洒消毒整个细胞瓶，随后在超净工作台进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃，5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后，再进行处理。显微镜下观察细胞的生长状况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，不予提供照片将默认细胞状态良好。

细胞传代步骤

a. 贴壁细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，并放回37℃、5% CO2孵箱继续培养；当细胞密度超过80%时，则可以开始传代。具体步骤如下：

1. 去除培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰酶消化液，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若细胞大部分圆化并脱落，迅速取出，轻敲培养瓶后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落，然后吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，去除上清液，与1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），添加新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 悬浮细胞传代

悬浮细胞传代步骤如下：

1. 使用半换液法，竖着放置培养瓶于培养箱静置约1小时，轻轻吸取约3ml培养基，并补充3ml完全培养基。若培养基变色速度较慢，可直接添加约500μl的FBS。在传代时可直接补充5ml培养基，将细胞分到两个培养瓶中，通常在此种情况下传代约3次后需进行离心换液，去除死细胞。
2. 如需分瓶，可将细胞悬液收集至离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，并补充1-2ml培养基重悬，然后按1:2比例分至新T25瓶中，添加6-8ml新配制的完全培养基，确保细胞的生长活力，后续可根据实际情况按1:2~1:5比例进行传代。

c. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞。
2. 加入约1ml的0.25%胰酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打以使细胞脱落，转移悬液至15ml离心管，1000RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（如Z6·尊龙凯时的相关产品），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存的细胞直接置于-80℃冰箱储存，若需转入液氮罐，须在-80℃冰箱中存放24小时以上。

d. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），快速放入37℃的水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml培养基重悬并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会松动，这属于正常现象。如果观察到脱落的细胞较多，可以将培养瓶中的培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后续做对比研究），沉淀后添加1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止消化。再次离心后，去除上清，重悬至1-2ml的完全培养基。最后按1:2比例进行分瓶传代，确保培养基补充至5-8ml/瓶，置入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

Z6·尊龙凯时致力于提供高质量的细胞培养产品，助力科研与医疗行业的发展。